Digifab и иммунонейтрализация кардиотонических стероидов при преэклампсии

Актуальность. Повышение концентрации дигиталис-подобных ингибиторов Na⁺/K⁺-АТФазы (NKA) - кардиотонических стероидов (КТС), в том числе маринобуфагенина (МБГ) играет большую роль в патогенезе преэклампсии (ПЭ), вызывая устойчивую вазоконстрикцию. При ПЭ успешно применяется Digibind (фаб-фрагменты аффинно-очищенных поликлональных антител к дигоксину), который нейтрализует кардиотонические стероиды, в том числе МБГ. В связи с тем, что Digibind в настоящее время недоступен и единственным используемым в клинике антителом к дигоксину является DigiFab (BTG International Ltd), мы сравнивали DigiFab и Digibind по способности взаимодействовать с КТС в плазме крови при ПЭ, а также восстанавливать активность NKА in vitro. Цель исследования. Мы сравнивали влияние Digibind и Digifab на NKА эритроцитов у пациентов с ПЭ и 6 беременных с нормальным артериальным давлением. Используя конкурентный иммунофлуорометрический метод, мы сравнивали взаимодействие обоих антител с фракциями, полученными методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) плазмы крови больных ПЭ. Материалы и методы. Было обследовано 7 пациенток с ПЭ (28 ± 2 лет; срок беременности 39,0 ± 0,5 недель, экскреция белка с мочой 2,12 ± 0,46 г/сут, артериальное давление 157 ± 5/94 ± 2 мм рт. ст.) и 9 пациенток контрольной группы (26 ± 1 лет; срок беременности 37 ± 1 недель, артериальное давление 112 ± 2/75 ± 3 мм рт. ст.). Результаты. При ПЭ наблюдалось значимое подавление NКА эритроцитов (1,47 ± 0,17 по отношению к 2,65 ± 0,16 мкмолФн/мл/час в контрольной группе, p < 0,001). При концентрации 10 мк/мл (что соответствует дозе Digibind, назначаемой при ПЭ) как Digibind, так и DigiFab частично, но значимо восстанавливали активность фермента (2,1 ± 0,2 и 2,05 ± 0,3 мкмолФн/мл/час соответственно). При использовании конкурентного иммунофлуорометрического анализа, Digibind и Digifab демонстрировали сравнимую кросс-реактивность с МБГ и оубаином. При дальнейшей хроматографии плазмы как Digibind, так и Digifab демонстрировали ассоциированное с ПЭ повышение концентрации во фракциях 16-18; 176 против 75 пмоль для Digibind в контрольной группе и при ПЭ соответственно; 221 против 70 пмоль для Digifab в контрольной группе и при ПЭ соответственно. 4G4 анти-МБГ моноклональное антитело выявляло вызванное ПЭ повышение КТС (1056 против 421 пмоль), максимум во фракции 16. Выводы. (1) Digifab и Digibind имеют сравнимую кросс-реактивность с КТС; (2) у пациенток с ПЭ увеличение содержания дигоксин-подобной иммунореактивности происходило пропорционально для Digifab и Digibind, и оба антитела вызывали восстановления активности NKА; (3) при жидкостной хроматографии плазмы пациенток с ПЭ, и Digifab и Digibind взаимодействовали с эндогенными буфадиенолидами, в том числе МБГ, в большей степени, чем с эндогенным оубаином.

1. MacKay A.P., Berg C.J., Atrash H.K. Pregnancy-related mortality from preeclampsia and eclampsia // Obstet. Gynecol. - 2001. - Vol. 97, № 4. - P. 533-538.

2.

3. Sibai B., Dekker G., Kupferminc M. Pre-eclampsia // Lancet. - 2005. - Vol. 365, № 9461. - P. 785-799.

4.

5. Graves S.W. The possible role of digitalislike factors in pregnancy-induced hypertension // Hypertension. - 1987. - Vol. 10, suppl. 1. - P. 184-186.

6.

7. Lopatin D.A., Ailamazian E.K., Dmitrieva R.I. et al. Circulating bufodienolide and cardenolide sodium pump inhibitors in preeclampsia // J. Hypertens. - 1999. - Vol. 17, № 8. - P. 1179-1187.

8.

9. Bagrov A.Y., Shapiro J.I., Fedorova O.V. Endogenous cardiotonic steroids: physiology, pharmacology and novel therapeutic targets // Pharmacol. Rev. - 2009. - Vol. 61, № 1. - P. 9-38.

10.

11. Bagrov A.Y., Fedorova O.V., Dmitrieva R.I. et al. Bufodienolide nature of endogenous inhibitor of Na/K ATPase in the urine from patients with acute myocardial infarction // Hypertension. - 1998. - Vol. 31, № 5. - P. 1097-1103.

12.

13. Fedorova O.V., Talan M.I., Agalakova N.I., Lakatta E.G., Bagrov A.Y. An endogenous ligand of α-1 sodium pump, marinobufagenin, is a novel mediator of sodium chloride dependent hypertension // Circulation. - 2002. - Vol. 105, № 9. - P. 1122-1127.

14.

15. Fedorova O.V., Lakatta E.G., Bagrov A.Y. Differential effects of acute NaCl loading on endogenous ouabain-like and marinobufagenin-like ligands of the sodium pump in Dahl hypertensive rats // Circulation. - 2000. - Vol. 102, № 24. - P. 3009-3014.

16.

17. Fedorova O.V., Shapiro J.I., Bagrov A.Y. Endogenous cardiotonic steroids and hypertension // Biochem. Biophys. Acta. - 2010. - Vol. 1802, № 12. - P. 1230-1236.

18.

19. Bekheirnia M.R., Schrier R.W. Pathophysiology of water and sodium retention: edematous states with normal kidney function // Curr. Opin. Pharmacol. - 2006. - Vol. 6, № 2. - P. 202-207.

20.

21. Fedorova O.V., Kolodkin N.I., Agalakova N.I. et al. Antibody to marinobufagenin lowers blood pressure in pregnant rats on a high NaCl intake // J. Hypertens. - 2005. - Vol. 23, № 4. - P. 835-842.

22.

23. Averina I.V., Tapilskaya N.I., Reznik V.A. et al. Endogenous Na/K-ATPase inhibitors in patients with preeclampsia // Cell. Mol. Biol. - 2006. - Vol. 52, № 8. - P. 19-23.

24.

25. Fedorova O.V., Simbirtsev A.S., Kolodkin N.I. et al. Monoclonal antibody to an endogenous bufadienolide, marinobufagenin, reverses preeclampsia-induced Na/K-ATPase inhibition in lowers blood pressure in NaCl-sensitive hypertension // J. Hypertens. - 2008. - Vol. 26, № 12. - P. 2414-2425.

26.

27. Goodlin R.C. Antidigoxin antibodies in eclampsia // N. Engl. J. Med. - 1988. - Vol. 318, № 8. - P. 518-519.

28.

29. Adair C.D., Buckalew V., Taylor K. et al. Elevated endoxin-like factor complicating a multifetal second trimester pregnancy: treatment with digoxin binding immunoglobulin // Am. J. Nephrol. - 1996. - Vol. 16, № 6. - P. 529-531.

30.

31. Adair C.D., Buckalew V.M., Kipikasa J., Torres C., Stallings S.P., Briery C.M. Repeated dosing of digoxin-fragmented antibody in preterm eclampsia // J. Perinatol. - 2009. - Vol. 29, № 2. - P. 163- 165.

32.

33. Adair C.D., Buckalew V.M., Graves S.W. et al. . Digoxin immune fab-treatment for severe preeclampsia // Am. J. Perinatol. - 2010. - Vol. 27, № 8. - P. 655-662.

34.

35. Hopoate-Sitake M.L., Adair C.D., Mason L.A., Torres C., Kipikasa J., Graves S.W. Digibind reverses inhibition of cellular Rb uptake caused by endogenous sodium pump inhibitors present in serum and placenta of women with preeclampsia // Reprod. Sci. - 2011. - Vol. 18, № 2. - P. 190-199.

36.

37. Fedorova O.V., Tapilskaya N.I., Bzhelyansky A.M. et al. Interaction of Digibind with endogenous cardiotonic steroids from preeclamptic placentae // J. Hypertens. - 2010. - Vol. 28, № 2. - P. 361-366.

38.